由于师傅平手政秀的死谏，信长终于开始不那么异行，而他也逐渐开始展现自己的獠牙。这两年来随着信长对外战争的活跃表现使得信长的声望大幅度提升，并且随着信长的一系列手段，下四郡的织田家开始慢慢被其整合。
打败织田信友入住清州城、数次北上进攻织田信贤、最近更是神速的平定了守山城的织田分家，这些功绩都是给了织田信行无形的巨大压力！又惊又怒的信行担心信长迟早要收拾自己，终于决定谋反，打算先下手为强。信行的行动和另一件事很有大的直接关系，那就是美浓的的巨变。
据美浓方面的传闻，由于正德寺会面时道三对信长的高度赞扬，以及去年道三出兵协助信长攻略上四郡等一系列行为都使得道三与义龙的关系越来越差，可以说是面临破裂。
道三之所以与义龙关系如此之差的主要原因据说是道三他怀疑义龙不是自己的骨肉，于是道三打算废嫡，改立幼子孙四郎，但他始终犹豫不决。其实也是没办法啊，这个时候还不能化验，除非他们知道千兵卫的系统，让千兵卫帮他鉴定。
正是斋藤道三对义龙的怀疑以及厌恶使得另一方义龙深信自己并不是道三的骨肉，在得知斋藤道三‘我儿只配为上总介拉马为奴矣’以及打算废嫡立幼后，于是义龙便开始策划谋反。
终于在经过义龙的不懈努力后大部分家臣都站在了义龙的一边，1555年的冬天，义龙打算先下手为强，于是他开始装病，到第二年chun天他突然召弟弟孙四郎、喜平次到稻叶山城说是交代后事，两人果然中计，于是都被义龙杀死，义龙由此正式与道三决裂。
正出外打猎的道三得知后，立即回鹭山城招集两千五百人防守，但义龙却集结了一万七千多人的大军，以土岐氏正嫡的名义向道三宣战，初战道三并与道三隔城对峙。最终于4月19ri斋藤义龙与斋藤道三大战于长良川。
织田信长得讯后立即出兵营救，但义龙却事先布置了数支部队阻挡住了信长的援军。最终信长还是晚了一步，道三由于兵力过于悬殊，寡不敌众而迅速溃败。道三本人更是被义龙方的大将小牧道家讨死，并被其取得首级。被称为倭国三大枭雄之一的“美浓蝮蛇”斋藤道三，在成功谋夺主家后的不久，也成为下一个下克上的受害者，享年六十三岁，葬于长良福光寺旁的首冢。
道三死前写下遗书，当中包含着美浓让国状。遗书中写道：“旧之恶果今报矣，明ri之战将五体不全，战死或不是错误，或许有我最后的住处，但在哪里？”。而让国状中写道：“美浓一国现由织田上总介所有，信长得此让状，必须遣兵渡此”。让国状对信长来说在长远意义上是很有用的，但是近期确实代价过大，浓尾同盟经历短暂的四年时间终告破裂，失去后援的信长就陷入了危机之中：东海道的今川家以及本家信行等人更是开始蠢蠢yu动！
见到信长失去外缘后，1556年8月4ri比历史上早了整整20天！在林秀贞和柴田胜家负责酝酿与指挥下，信行的谋反终于开始了。由于准备充足，所以信行很快就集结了两千兵马，连克守山、那古野等要隘，他的队伍还不断的膨胀，几乎兵临清洲城城下。
对于此次信行的谋叛信长没有感到惊讶，因为这是全尾张上至武士下到平民每个人都预料过的事。似乎不应毫无准备的信长却仅仅拉起了六七百兵马与之相抗，当中包括了拥护信长的直臣：佐久间盛重、佐久间信盛、丹羽长秀、佐佐政次等人。而守山城的津田信成、津田信昌城破战败后就逃向井田城避难去了，而那古野的织田秀孝则是城破战败投降，算是对信长尽职了。
